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显微镜在临床的操作知识

光学显微镜是兽医临床诊疗中最常用的工具之一,常规的样本检验均需要使用光学显微镜,如血液、尿液、粪便、体腔液等,因此光学显微镜的使用尤为重要。那么关于光学显微镜的认识、使用、保养和维护,您知多少,希望以下的内容会给您带来一些帮助。

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以下介绍光学显微镜结构的主要部分:

  1. 目镜: 将物镜放大的实像进一步放大成一个起立的虚像,其作用相当于一个放大镜,但是目镜并不增加光学显微镜的分辨力。一般光学显微镜备有几个放大倍数不同的目镜,放大倍数会刻在目镜边缘,如 5x 、 10x 和 15x 等,临床最常用放大 10x 的目镜。

  1. 物镜: 多数复式显微镜有 3 个或 4 个物镜,每个物镜的放大率都不同,多数物镜的放大倍数包括: 4x (扫描)、 10x (低倍)、 40x (高倍)和 100x (油镜)。物体的放大倍数为目镜的放大倍数乘以物镜的放大倍数,如物体放置在 4x 的物镜下,用 10x 目镜观察,镜下的放大倍数为 40x [ ( 4x ) X ( 10x ) ] 。

  2. 聚光器: 作用是会聚由反射镜反射来的光线,增加标本的照明,升降聚光器,可调节照明强度和改变对比度。

  3. 光圈环: 由十余片金属薄片组成,中心部分形成圆孔,通过旋转光圈环,可调节圆孔的大小,由此调节光线的强弱。

  4. 粗准焦螺旋和细准焦螺旋: 调节物镜与标本之间的距离,使物镜的焦点对准标本,得到更清晰的图像,粗准焦螺旋旋转一周可使镜筒升降 20mm ,细准焦螺旋每旋转一周可使镜筒升降 0.1mm 或更小。

1 、调整合适的座椅高度和显微镜的摆放位置

对于长时间需要观看显微镜的临床工作者来说,这一点非常重要,主要是保证自己身体健康的情况下也能感受到工作的舒适。

合适的座椅高度:显微镜的摆放位置:1 )显微镜应该长期放置在一个平坦、不需要挪动和不被震动的地方,应该远离离心机和振荡器;2 )周围有足够的空间放置玻片和参阅书籍。

2. 使用光学显微镜的步骤

  1. 调节粗准焦螺旋,将载物台调节到最低点,打开光源,检查目镜、物镜和 聚光器镜头,必要时进行清洁;

  2. 将载玻片放置在载物台上,固定在样本固定器中间,旋转物镜转换器, 4x 物镜下扫查观察区域,获得样本的整体印象;

  3. 旋转物镜转换器,在 10x 物镜下对准观察物,注意不要直接旋转物镜;

  4. 在目镜下观察,调节目镜的距离,使双孔目镜观测的区域相近,直到双眼观察的视野相同;

  5. 调节聚光器、光圈和粗准焦螺旋,使观察物位于焦点位置,旋转细准焦螺旋直到样本清楚聚焦;

  6. 转换 40x 物镜,调节粗细准焦螺旋对样本进行聚焦,调节聚光器和光圈,使细节观察更为清晰;

  7. 需要油镜观察细胞结构时,物镜转换到 4x 物镜下,对样本聚焦,滴加一滴显微镜浸油,直接旋转到 100x 油镜下,调节细准焦螺旋聚焦样本,调节聚光器和光圈,使样本观察更为清晰;

  8. 使用完毕后,关掉电源或将光亮调到最小,将载物台调至最低位置,旋回 4x 物镜到原来的位置,拿走载玻片,必要时用镜头纸擦拭 100x 镜头。

  1. 需要根据制造商提供的说明书对光学显微镜进行保养和维护;

  2. 清洁镜头需要用到专用的镜头试纸,必要时使用清洁剂,如甲醇或二甲苯,注意甲醇和二甲苯易燃且有毒,避免直接用手接触,使用结束后立刻遮盖试剂瓶;

  1. 准备一些备用灯泡,更换灯泡要在切断电源的情况下进行,待灯泡冷却后更换新的灯泡,要求灯泡型号一致,避免用手直接触碰灯泡,因为油脂会缩短灯泡寿命;

  2. 避免显微镜放置于高温潮湿的地方,不使用时应该避光防尘保持,挪动显微镜时用双手,一只手托住显微镜底盘,另一只手握住镜臂。

  1. 转换物镜时旋转物镜转换器,而不是直接转动物镜,避免滑脱物镜导致损伤;

  2. 不可将高倍镜镜头与显微镜镜油接触,接触后及时用清洁剂擦拭干净;

  3. 观察结束后先将油镜转换成低倍镜下,再拿走载玻片,避免损伤镜头,及时用擦镜纸擦拭油镜镜头;

  4. 显微镜使用结束后,关闭电源或将光亮调至最小,不用时关闭电源,盖好防尘罩。

临床检验过程中,需要对样本进行显微镜观察,因此以下为样本检验的显微镜操作:

1.血细胞、细胞学、体腔液和分泌物染片

  1. 低倍镜下扫查,调节粗细准焦螺旋,找到观察区域;

  2. 转换高倍镜, 调低聚光器 ,调节光圈找到合适的光强度,旋转细准焦螺旋使样本更清晰;也可 滴加一滴镜油盖上盖玻片 ,在高倍镜下也能清晰的观察细胞(见图 2 );

  3. 转换低倍镜,滴加镜油,旋转转换器到油镜下, 调高聚光器,使贴近于玻片,将光圈调大 ,旋转细准焦螺旋,清晰观察样本(见图 3 );

  4. 观察结束,关闭电源或调低光亮至最小,调低载物台或旋转到低倍镜,拿走玻片,擦拭油镜镜头。

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图2 两图均为高倍镜下的血细胞,左图为滴加一滴镜油,盖上盖玻片后显微镜下观察的结果;右图为未滴加镜油观察的结果(其他条件一致)。

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图3 左图为犬皮肤肥大细胞瘤油镜下观察的结果;右图为犬血涂片油镜下观察的结果(升高聚光器贴近于玻片)

2.粪便、尿液、皮肤活片和染片

  1. 粪便、尿液和皮肤活片低倍镜下扫查,调节粗细准焦螺旋,找到观察区域, 调低聚光器 ,增加对比度, 减少光圈 ,降低光强度,转换高倍镜下观察(注意盖上盖玻片,避免污染镜头),调节细准焦螺旋,清晰观察样本(见图 4 );

  2. 粪便、尿液和皮肤涂片 低倍镜下扫查,调节粗细准焦螺旋,找到观察区域,旋转到高倍镜下,仔细扫查样本,需要油镜下观察时, 调高聚光器 ,贴近于玻片, 增大光圈 ,增强光强度,滴加镜油,转换到油镜下调节细准焦螺旋,清晰观察样本。

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图4 两图均为粪便的活片,左图为降低聚光器显微镜结果;右图为未降低聚光器的显微镜结果。


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